home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ The Arsenal Files 6 / The Arsenal Files 6 (Arsenal Computer).ISO / health / med9605a.zip / M9650028.TXT < prev    next >
Text File  |  1996-03-09  |  2KB  |  36 lines
  1.        Document 0028
  2.  DOCN  M9650028
  3.  TI    In situ polymerase chain reaction technique revealed by flow cytometry
  4.        as a tool for gene detection.
  5.  DT    9605
  6.  AU    Gibellini D; Zauli G; Re MC; Furlini G; Lolli S; Bassini A; Celeghini C;
  7.        La Placa M; Institute of Microbiology, University of Bologna, Italy.
  8.  SO    Anal Biochem. 1995 Jul 1;228(2):252-8. Unique Identifier : AIDSLINE
  9.        MED/96171045
  10.  AB    We report a methodology for detecting specific DNA sequences directly
  11.        inside cells, combining in situ PCR and flow cytometry. This technique
  12.        is based on in situ PCR performed in the presence of digoxigenin-labeled
  13.        dUTP to obtain a digoxigenin-labeled amplicon, which is then revealed by
  14.        an anti-digoxigenin polyclonal antibody directly conjugated to
  15.        fluorescein. Fluorescence intensity is next evaluated by flow cytometry.
  16.        Our experimental models were represented by the lymphoblastoid cell
  17.        lines 8E5LAV, carrying an integrated HIV-1 DNA proviral copy per cell,
  18.        and A.301, infected in vitro with HIV-1 (strain IIIB). The technique is
  19.        described in detail with particular attention to the optimization of
  20.        critical fixation and permeabilization steps. This method allows not
  21.        only the detection but also an accurate quantification of the number of
  22.        positive cells in a background of negative cells. Moreover, it has the
  23.        potentiality to develop into a multiparametric method for the
  24.        simultaneous study of specific DNA or RNA sequences and surface or
  25.        intracellular markers.
  26.  DE    Base Sequence  Cell Line  Cell Membrane Permeability  Cloning, Molecular
  27.        Digoxigenin  DNA, Viral/*ANALYSIS  *Flow Cytometry  Gene Products,
  28.        gag/ANALYSIS  HIV-1/*GENETICS  In Situ Hybridization
  29.        Lymphocytes/VIROLOGY  Models, Biological  Molecular Sequence Data
  30.        Polymerase Chain Reaction/*METHODS  Stem Cells/VIROLOGY  Support,
  31.        Non-U.S. Gov't  JOURNAL ARTICLE
  32.  
  33.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  34.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  35.  
  36.